O Neurotransmissor: CLARITY

Então, como os pesquisadores de Stanford chegaram ao que é chamado de CLARITY ?

Bem, primeiramente foiinfundindo monômeros de hidrogel — no caso, acrilamida e bissacrilamida — e formaldeído no tecido a 4ºC. O formaldeído liga covalentemente os monômeros de hidrogel a biomoléculas incluindo proteínas, ácidos nucleicos e pequenas moléculas. No próximo passo, a polimerização do conjugado de biomoléculas e monômeros em uma rede de hidrogel , ocorre por incubação do tecido infundido a 37ºC por 3 horas.

A hibridização do tecido-hidrogel suporta fisicamente o tecido e incorpora quimicamente biomoléculas na rede formada. Lipídios e biomoléculas que não possuem os grupos funcionais para a conjugação continuam desatados da rede de hidrogel e podem, então, ser removidos do hibrido.

Então, para a extração dos lipídios nesse novo método foi desenvolvido uma técnica iônica de extração. Usualmente utilizam-se solventes orgânicos, porém, os mesmo diminuem a eficiência da fluorescência no momento da visualização microscópica. Então, foi colocado o detergente SDS (dodecil sulfato de sódio), as micelas do detergente envolviam os lipídios e foram retirada por uma técnica ativa de transporte, que foi determinada como electrophoretic tissue clearing (ETC) , que se concentra na característica das micelas iônicas de serem altamente carregadas.

O hidrogel então asseguraria as biomolécula e características estruturais como proteínas de membrana e sinapses, enquanto o lipídio que causa dispersão da luz e dificulta a penentraçao de macromoléculas seria ativamente removido, deixando um sistema biológico totalmente associado disponível a para fenotipação e imagem em alta resolução.

Figura 1